शिखंडी का जन्म काशी के राजा की सबसे बड़ी बेटी अंबा के रूप में हुआ था, जिसका अपहरण भीष्म ने अपने भाई विचित्रवीर्य के लिए कर लिया था.
शिखंडी को एक बेटे की तरह पाला गया और उसकी शादी दशार्ण की राजकुमारी से हुई, जिसे पता चला कि उसका पति एक महिला थी,
अम्बा साल्व के राजा से प्रेम करती थी, जिसने भीष्म द्वारा ले जाने के बाद उसे अस्वीकार कर दिया था, उसने भीष्म से विवाह करने के लिए कहा, लेकिन उन्होंने ब्रह्मचर्य की प्रतिज्ञा के कारण इनकार कर दिया था.
अंबा ने भीष्म के गुरु परशुराम से उन्हें विवाह करने के लिए मजबूर करने के लिए मदद मांगी, लेकिन परशुराम भीष्म को युद्ध में हराने में असफल रहे.
अंबा ने कठोर तपस्या की और शिव से भीष्म की मृत्यु का कारण बनने का वरदान प्राप्त किया, इसके बाद उन्होंने आत्मदाह कर लिया और राजा द्रुपद की बेटी शिखंडिनी के रूप में पुनर्जन्म लिया.
शिखंडी एक योद्धा बन गई और उसने पांडवों, जो उसके बहनोई थे, उनकी ओर से कौरवों के खिलाफ लड़ाई लड़ी, जिन्हें भीष्म का समर्थन प्राप्त था.
कुरुक्षेत्र युद्ध के दसवें दिन शिखंडी ने भीष्म का सामना किया और उनके पतन का कारण बनी, क्योंकि भीष्म ने किसी महिला या किसी महिला से युद्ध न करने की कसम खाई थी.